逐行分析超高密度HepG2文化

导 言

多年以来,多类高密度文化方法,如人机、纤维脚架和外细胞矩阵等,都提议用于体外细胞剖析与平面基数标准单层文化相比,这些文化系统被识别为更精确模拟细胞自然环境高密度培养条件中的细胞预期会显示反化反应 接近组织响应维沃.

原为单层文化开发的一般同质检验协议可适用于这些高密度文化系统并稍加修改
然而,对于显像学和其他图像分析,应用传统图像分析协议高密度文化时有重大障碍需要克服多显微镜相联研究工具的光学架构不捕捉光基信息此外,为单层细胞培养优化图像分析软件无法逐细胞对象识别并产生量化

显示一组高密度HepG2细胞文化解释CQ1从细胞层三维全厚中获取清晰图像并显示CQ1逐行分析细胞反化学处理
协议对高密度文化有潜在应用分析作用,包括三维细胞培养条件

图1高密度HepG2文化与核聚合图像
非处理(a)或staurosporine(10-7M48H)处理(c)
三维逐细胞核识别使用CQ1软件Spheroid分析算法bObjective透镜20X

实验过程

96水底微板涂上多细胞矩阵Matrigel5折稀释
HEPG2细胞预包板上播种,密度5X104细胞/井盘子孵化48小时 制造过度容积状态
Staurosporine添加实验水井,板块孵化48小时并增加48小时
Cells使用甲状腺溶液固定并贴上抗药性caspase3和反H3Ser10P标签双基本抗体用荧光标二级抗体视觉化细胞核在RNaseA面前染色Draq7
CQ1采集Cell图像分析图形绘制和统计处理使用FCSExpressTM5图像几何法(denovo软件,Glendale,CA)(可选性)。

结果和讨论

超高密度HepG2细胞培养由CQ1逐行分析评价细胞响应
为促进稠密细胞层编组,板块涂上外细胞矩阵初步测试中,与非封装普通塑料底板相比,HepG2细胞嵌入基数显示约十倍对staurosporine毒性敏感度(数据未显示)。
日光标签细胞图象从厚细胞层结构中分三次捕捉(图2)H3Ser10P(细胞生长)和主动capase-3(potocis
单细胞核增强逐细胞特征分解响应 sturosporine
CQ1系统多功能化,允许同时分析高密度细胞文化分析单细胞层次多标记和参数,包括厚细胞积

图23D重构HepG2手机图片
21片多色图像覆盖50微米厚度重构3D图像非经处理(a)或staurosporine处理(b)细胞与反H3Ser10P(mgistra)和反活性caspase-3(Green)相联的荧光免疫细胞核染色Draq7Objective透镜20X

图3 多参数分析两个单元格标识
CQ1图象分析数据未经处理(a)或staurosporine处理(b)导出并用FCSExpressTM5图像几何散块进一步分析生长或死细胞比例量化评价分布图上图一X104事件

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